Padėkite kurti svetainę ir pasidalykite straipsniu su draugais!

PGR yra testas, kuris buvo naudojamas diagnozuojant daugelį ligų. PGR metodas leidžia parodyti tiesioginį bakterijų buvimą organizme, o būtent jo DNR. PGR, be kita ko, naudojamas diagnozuojant Laimo ligą. Kas yra PGR technika? Kas yra realaus laiko PGR?

Turinys:

  1. PGR (testas) – kas yra PGR technika?
  2. PGR (testas) - PGR metodo taikymas
  3. PGR (testas) – Laimo liga
  4. PGR (testas) – rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai teigiami?
  5. PGR (testas) – rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai neigiami

PGR(polimerazės grandininė reakcija) yra pagrindinis metodas, naudojamas genetinėse ir molekulinėse laboratorijose. Jį 1983 m. sukūrė Kara Mullis, kuriai 1993 m. buvo skirta Nobelio premija.

PGR (testas) – kas yra PGR technika?

PGR testassusideda iš daugkartinio specifinio DNR fragmento, pvz., Borrelia b altymus koduojančių genų, amplifikacijos (paprastai per 30–40 ciklų), naudojant polimerazės fermentą.

Tada, norint vizualizuoti amplifikuotą DNR fragmentą, naudojami specialūs molekuliniai dažai. Dėl specifinių DNR fragmentų amplifikacijos PGR yra itin jautrus metodas.

Taikant PGR metodą, DNR fragmentai amplifikuojami naudojant specifines pradmenų poras tam tikram bakterijos DNR regionui. Pavyzdžiui, Laimo ligos diagnozei naudojamos PGR tikslinės sritys yra genai, koduojantys b altymus, pvz. 16S rDNR, recA, fla, p66, OspA.

Biologinė medžiaga, iš kurios galima atlikti bandymą, yra:

  • kraujas
  • odos pjūvis nuo migruojančios eritemos
  • smegenų skystis
  • sinovinis ar kremzlės skystis
  • šlapimas

PGR (testas) - PGR metodo taikymas

Be Laimo boreliozės diagnozės, PGR metodu galima aptikti specifinius kitų mikroorganizmų ar žmonių DNR fragmentus. Todėl PGR metodas taip pat naudojamas:

  • virusinių infekcijų diagnostika ir stebėjimas: herpes virusai (herpes virusas, juostinė pūslelinė, Epstein-Barr, citomegalovirusas), ŽIV, hepatito virusai (HBV ir HCV)
  • bakterinių infekcijų, ypač tų bakterijų, diagnostika ir stebėjimas,kurių negalima atpažinti per kultūras, pvz., tuberkuliozė
  • neoplastinių ligų diagnostika ir stebėjimas: leukemija, krūties vėžys, gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžys, plaučių vėžys
  • vėžio polinkio diagnozė: krūties ir kiaušidžių vėžys (BRCA1 ir BRCA2 genai), gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžys (genai APC ir CHEK2)
  • genetinių ligų diagnostika: hemochromatozė (HFE genas), talasemija (HBA1 ir HBA2 genai), celiakija (HLA genai)
  • tėvystės testai, kuriais nustatomas vaiko ir tėvo DNR suderinamumas
Verta žinoti

Šiuo metu yra daug PGR metodo modifikacijų. Pavyzdžiui, diagnozuojant Laimo ligą, daugiausia naudojami įdėtos PGR (įdėtos PGR) ir realaus laiko PGR ( ) metodai. Pastarasis yra kiekybinis metodas ir leidžia nustatyti tikslų borelijų DNR kopijų skaičių tirtoje biologinėje medžiagoje

PGR (testas) ir Laimo liga

Laimo ligos diagnozavimo pagrindas yra serologiniai tyrimai. Tačiau yra klinikinių situacijų, dėl kurių šie tyrimai gali būti klaidingai neigiami:

  • serologinis langas, t.y. pradinis infekcijos laikotarpis, kai organizmas dar negamina specifinių IgM ir IgG antikūnų prieš boreliją
  • žmonėms, kurių imunitetas nusilpęs ir kurie negamina pakankamai antikūnų
  • buvimas imuninių kompleksų, susidedančių iš borelijų antigenų ir specifinių antikūnų jiems ir neleidžia aptikti antikūnų serologiniais metodais

Jei pacientui įtariami Laimo ligos simptomai, o serologinio tyrimo rezultatai yra neigiami, galima atlikti PGR metodu pagrįstą molekulinį tyrimą

Borrelia spirochetų DNR galima aptikti ankstyvose infekcijos stadijose, nes tada spirochetų skaičius kūno skysčiuose yra didžiausias.

Laimo boreliozės diagnozei pirmiausia naudojami serologiniai metodai, pvz., ELISA, tačiau kai kuriose klinikinėse situacijose padeda genetinis tyrimas naudojant PGR metodą

Kuo ilgesnis laikas nuo užsikrėtimo, tuo mažesnė tikimybė aptikti bakterinę DNR. Todėl kai kuriais atvejais, prieš atliekant PGR tyrimą, bakterijos auginamos specialiose terpėse 1-2 savaites ir tada atliekamas tyrimas

Šis metodas taikomas įtarus Laimo ligą ir paimtą smegenų skystį. Vėlyvoje infekcijos fazėje tikslingiau atlikti ELISA testą.

PGR metodas neturėtų būti naudojamas įprastinei Laimo ligos diagnostikai dėl standartizacijos stokosdėl Borrelia burgdorferi veislių atsiradimo Lenkijoje.

Tačiau esant sunkumams diagnozuojant (ypač ankstyvoje ligos stadijoje), PGR tyrimo rezultatas yra naudingas diagnostikos procese.

Teigiamas tyrimo rezultatas reiškia, kad tiriamoje medžiagoje buvo aptikta Borrelia burgdorferi DNR ir jos variantų, tačiau nepaaiškina, ar organizmas yra aktyviai užsikrėtęs. Kita vertus, neigiamas rezultatas neatmeta bakterijų buvimo organizme.

Kai kurios laboratorijos siūlo tirti borelijų DNR erkėje. Tačiau tokio tyrimo rezultatas nėra pagrindas diagnozuoti Laimo ligą įkandusiam žmogui.

PGR – rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai teigiami?

PGR yra itin jautrus metodas ir tuo pat metu labai jautrus užteršimui. Todėl atliekant PGR pagrįstus tyrimus labai svarbu pasirinkti tinkamą vidinę kontrolę, kad būtų išvengta klaidingai teigiamų rezultatų.

Taip pat labai svarbu teisingai surinkti medžiagą tyrimams, taip pat diagnostikos specialisto, atliekančio tyrimą, patirtis ir patikimumas

PGR – rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai neigiami

Kaip ir atliekant bet kurį laboratorinį tyrimą, taip pat atliekant PGR metodą, gali atsirasti klaidingai neigiami rezultatai. Čia labai svarbu paimti kraują tinkamam antikoaguliantui, nes kai kurie iš jų, pavyzdžiui, heparinas, gali slopinti PGR reakciją.

Medžiagos rinkimas pradėjus gydymą antibiotikais gali sumažinti PGR reakcijos efektyvumą ir padidinti klaidingai neigiamų rezultatų tikimybę.

Taip pat reikia atsiminti, kad Borrelia bakterijos labai trumpai gyvena kraujyje ir kūno skysčiuose, nes specialių receptorių dėka labai greitai prasiskverbia į „sunkiai pasiekiamas“ kūno vietas.

Todėl, skirtingai nuo kitų mikroorganizmų diagnostikos, Borrelia spirochetų skaičius biologinėje medžiagoje yra mažas, kartais net ties PGR metodo aptikimo riba. Tai taip pat gali sukelti klaidingą neigiamą rezultatą.

Nuorodos

  1. Dunaj J. ir kt.. PGR metodo svarba diagnozuojant Laimo boreliozę. Naršyti Epidemiol. 2013, 67, 119–123.
  2. Erkių platinamų ligų laboratorinė diagnostika Darbo grupės rekomendacijos: Nacionaliniai laboratorijos diagnostikos rūmai, Nacionalinis visuomenės sveikatos institutas-Nacionalinis higienos institutas, Nacionalinis konsultantas infekcinių ligų srityje, Užkrečiamųjų ligų ir neuroinfekcijų skyrius , Balstogės medicinos universitetas, Lenkijos virusologijos draugija, Varšuva, 2014 m.
  3. Ružić-Sabljić E. ir Cerar T. Laimo ligos molekulinės diagnostikos pažanga. Ekspertas Rev Mol Diagn. 2022 mSausio 17 (1): 19–30.
  4. Valones M.A.A. ir kt.. Polimerazės grandininės reakcijos principai ir taikymas medicinos diagnostikos srityse: apžvalga. Braz J Microbiol. 2009 m. sausis-kovas; 40 (1): 1–11.
Apie autoriųKarolina Karabin, medicinos mokslų daktarė, molekulinė biologė, laboratorijos diagnostė, Cambridge Diagnostics PolskaPagal profesiją biologas, specializuojasi mikrobiologijoje ir laboratorinis diagnostikas, turintis daugiau nei 10 metų laboratorinio darbo patirtį. Molekulinės medicinos koledžo absolventas ir Lenkijos žmogaus genetikos draugijos narys. Mokslinių tyrimų stipendijų vadovas Varšuvos medicinos universiteto Hematologijos, onkologijos ir vidaus ligų katedros Molekulinės diagnostikos laboratorijoje. Varšuvos medicinos universiteto 1-ajame medicinos fakultete apgynė medicinos biologijos krypties medicinos mokslų daktarės vardą. Daugelio mokslinių ir populiarių mokslo darbų laboratorinės diagnostikos, molekulinės biologijos ir mitybos srityse autorius. Kasdien, kaip laboratorinės diagnostikos srities specialistas, jis vadovauja Cambridge Diagnostics Polska turinio skyriui ir bendradarbiauja su CD Dietary Clinic dietologų komanda. Praktinėmis žiniomis apie ligų diagnostiką ir dietoterapiją jis dalijasi su specialistais konferencijose, mokymuose, žurnaluose ir interneto svetainėse. Ją ypač domina šiuolaikinio gyvenimo būdo įtaka molekuliniams procesams organizme.

Padėkite kurti svetainę ir pasidalykite straipsniu su draugais!

Kategorija:

Tyrimai