ELISA testas nustato daugybę ligų, todėl jis buvo plačiai naudojamas medicinoje ir kt. Tačiau ELISA testas geriausiai žinomas dėl Laimo ligos diagnozavimo. Kas yra ELISA testas? Kaip interpretuoti rezultatus? Kokia testo kaina?

Turinys:

  1. ELISA testas – ką jis nustato? ELISA naudojimas
  2. ELISA testas – kas yra testas?
  3. ELISA testas ir Laimo liga – kada atlikti?
  4. ELISA testas - kaina. Kiek kainuoja ELISA testas?
  5. ELISA testas – rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai teigiami?
  6. ELISA testas – rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai neigiami?

ELISA testas , t. y. su fermentais susijęs imunosorbentinis tyrimas, yra dažniausiai naudojamas laboratorinis metodas, kuris, be kita ko, yra kiekybiniam antikūnų kiekiui kraujyje nustatyti.

Dėl toELISA testasrastastaikymasdiagnozuojant bakterines ligas, tokias kaipLaimo liga su Laimu.

ELISA metodo pranašumas yra jo paprastumas, greitas vykdymas ir didelis jautrumas. ELISA metodas atliekamas naudojant specialias plastikines plokšteles su šulinėliais, užpildytais, pvz., Borelijos b altymais (antigenais) ir specifiniais monokloniniais antikūnais, kurie yra skirti antikūnams paciento mėginyje aptikti.

ELISA testas – ką jis nustato? ELISA naudojimas

Dėl didelio ELISA metodo jautrumo ir paprastumo jis buvo pritaikytas diagnozuojant daugelį ligų, tačiau jis geriausiai žinomas kaip Laimo ligos diagnostikos metodas.

Diagnozuojant Laimo boreliozę, vadinamasis netiesioginis ELISA, leidžiantis aptikti specifinį IgM arba IgG tiriamoje medžiagoje. Tokiu pat būdu antikūnai gali būti aptikti diagnostikos tikslais:

  • virusinės infekcijos: herpes virusai (herpesas, juostinė pūslelinė, Epstein-Barr, citomegalovirusas), ŽIV, hepatito virusai (HBV ir HCV)
  • pirmuonių infekcijos: toksoplazmozė, giardiazė
  • autoimuninės ligos: celiakija (anti-tTG arba anti-DPG antikūnai), Hashimoto liga (anti-TG ir anti-TPO antikūnai), uždegiminės žarnyno ligos (anti-ASCA ir anti-ANCA antikūnai)
  • parazitinės ligos ir alergijos,kuriame aptinkami specifiniai IgE antikūnai. Padidėjęs jų lygis gali rodyti alergiją, pvz., žiedadulkėms ir maistui, arba parazitų invazijas (ginkluotas kaspinuočiai, žmogaus apvaliosios kirmėlės)

Taip pat yra ELISA metodo modifikacijų (vadinamojo sumuštinių ELISA), kurios leidžia aptikti ištirtą b altymų mėginį, išskyrus antikūnus. Tada tyrimo tikslas yra aptikti biologinėje medžiagoje:

  • virusų ar bakterijų fragmentai, dažniausiai tai yra tam tikram patogenui būdingi antigenai
  • serumo hormonų, pvz., estrogeno, prolaktino, TSH, fT4, kortizolio
  • fermentai, pvz., kalprotektinas, kasos elastazė, šarminė fosfatazė
  • naviko žymenų, pvz., CA-125
  • vaistų buvimas serume

Šis metodas taip pat naudojamas maisto pramonėje, kur maiste galima aptikti nedidelius alergenų (pvz., pieno, žemės riešutų), GMO ar toksinų kiekius.

ELISA testas – kas tai per testas?

Pavyzdžiui, Laimo boreliozės diagnozė, naudojant ELISA metodą, apima imuninių b altymų aptikimą biologinėje medžiagoje – antikūnus, atsirandančius reaguojant į Borrelia antigenus.

Antikūnai tiriami pagal dvi klases – IgM ir IgG. IgM yra pirmieji antikūnai, kurie atsiranda organizme po sąlyčio su bakterijomis ir laikui bėgant mažėja.

Jų vietą užima patvaresni IgG antikūnai, kurie organizme gali išlikti keliasdešimt metų.

Tokiu būdu bakterijų buvimas organizme yra netiesiogiai tiriamas aptinkant antikūnus, specialiai nukreiptus prieš Borrelia spirochetes.

Antikūnai įvairiose infekcijos stadijose gali būti nukreipti prieš įvairius borelijų b altymus. Pavyzdžiui, ankstyvoje stadijoje tai yra p41 b altymas.

Vėlesnėse stadijose pradeda atsirasti vis daugiau b altymų, tokių kaip p21, p30, p39, p43. Štai kodėl Laimo ligos diagnozė yra nepaprastai sunki.

Bakterinių b altymų parinkimas yra nepaprastai svarbus, kad testas turėtų didelę diagnostinę vertę. Todėl, diagnozuojant Laimo ligą, reguliariai reikėtų naudoti II arba III kartos ELISA testus, kurių metu b altymų rinkiniai parenkami taip, kad būtų gautas patikimiausias rezultatas.

ELISA testas ir Laimo liga. Kada atlikti?

Laimo boreliozė yra bakterinė liga, kurią sukelia bakterija Borrelia burgdorferi ir daugybė jos veislių.

Ligą diagnozuoti nelengva dėl imuninio atsako prieš borelijas sudėtingumo ir laboratorinių metodų netobulumo.

Plačiausiai naudojamas laboratorinis metodas yra labai jautrus ELISA metodas, kuris aptinka specifinius antikūnus, sukurtus prieš bakterijų b altymus.

Laimo boreliozės diagnozei naudojamas netiesioginis ELISA metodas, kurio metu išskiriamos šios stadijos:

  • plokštelės šulinėlių inkubavimas su medžiaga, paimta iš paciento, pvz., serumu. Jei tiriamoje medžiagoje yra antikūnų prieš borelijas, jie jungiasi su b altymais reakcijos šulinio apačioje
  • tada serumo perteklius išskalaujamas specialiu plovimo skysčiu (buferiu) ir taip vadinama. konjugatas, t. y. antikūnas, susietas su fermentu, kuris jungiasi su anksčiau susietais antikūnais reakcijos šuliniuose
  • Konjugato substratas pridedamas vėliau ir nėra (teigiamos) arba jokios spalvos reakcijos (neigiamos)
  • paskutinis žingsnis yra skaitytuvo (spektrofotometro) antikūnų prieš borelijas koncentracijos paciento serume nuskaitymas

ELISA metodas Laimo ligai gydyti atliekamas su krauju, o esant neurologiniams simptomams (neuroboreliozei) – ir su smegenų skysčiu.

Sinovinis skystis neturėtų būti tiriamas, nes yra didelė klaidingai teigiamų rezultatų tikimybė.

Ligos diagnozavimo pagrindas yra ją rodantys klinikiniai simptomai, patvirtinti laboratorinių tyrimų rezultatais.

Laboratorinio tyrimo rezultato pridėjimas be simptomų nesuteikia teisės diagnozuoti Laimo ligos, nes buvo įrodyta, kad antikūnai prieš Borrelia spirochetas aptinkami ir sveikiems žmonėms.

Serologinė Laimo boreliozės diagnozė pradedama atliekant pusiau kiekybinį ELISA atrankos testą. Jei rezultatas neigiamas, tai reiškia, kad Borrelia spirochetų neaptikta arba rezultatas yra klaidingai neigiamas.

Jei rezultatas teigiamas arba silpnai teigiamas (dviprasmiškas), patvirtinantis Western blot testas, kuris yra labai specifiškas.

Tai patvirtina ELISA metodu gautų rezultatų „tiesumą“. Diagnostikos metu negalite praleisti nė vieno iš aukščiau nurodytų veiksmų ir, pavyzdžiui, atlikti diagnostiką Western blot metodu arba nustatyti diagnozę remiantis teigiamu rezultatu tik naudojant ELISA metodą.

Lenkijoje Laimo ligos diagnozė labai dažnai baigiasi pirmoje patikros stadijoje, todėl klaidingai interpretuojami teigiami arba silpnai teigiami rezultatai.

Verta žinoti

ELISA testas - kaina. Kiek kainuoja ELISA testas?

Testas kainuoja apie 60zlotų ir pagaminama iš karto. Tačiau persiuntimo rezultatų galite palaukti apie tris mėnesius.

ELISA testas – rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai teigiami?

Klaidingai teigiami rezultatai gaunami dėl kryžminio IgM antikūnų reaktyvumo su kitais b altymais. Organizmo gaminami antikūnai gali „neteisingai“ atpažinti kitų mikroorganizmų antigeną kaip borelijų antigeną.

Dažniausios „klaidos“ daromos žmonėms, užsikrėtusiems šviesiąja treponema, herpeso virusais ir sergantiems sistemine raudonąja vilklige bei kitomis reumatinėmis ligomis.

ELISA testas – rezultatai. Ar jie gali būti klaidingai neigiami?

Klaidingai neigiami rezultatai gali pasirodyti ankstyvoje infekcijos stadijoje, tada testą reikia pakartoti maždaug po 3-4 savaičių. Tai vadinama serologinis langas, t. y. pradinis infekcijos laikotarpis, kai organizmas dar „nesugebėjo“ gaminti specifinių antikūnų.

Panašiai ir žmonėms, kurių imunitetas susilpnėjęs, kurie negamina pakankamai antikūnų.

Didelė problema, ypač esant labai intensyvioms infekcijoms, yra vadinamųjų infekcijų atsiradimas. imuniniai kompleksai, susidedantys iš Borrelia spirochetes antigenų ir specifinių jiems antikūnų.

Dėl to antikūnai „nematomi“ įprastai naudojamiems metodams, tokiems kaip ELISA, ir nors jų yra tiriamoje medžiagoje, jų aptikti negalima.

Tokiais atvejais laboratorija gali naudoti imuninių kompleksų skaidymą. Šis gydymas skirtas antikūnų išsiskyrimui. Tačiau šis metodas nėra plačiai naudojamas, nes laboratorijose nėra standartizacijos.

Verta žinoti

Kodėl nelengva diagnozuoti Laimo ligą?

Taip yra dėl imuninio atsako prieš borelijas sudėtingumo ir laboratorinių metodų apribojimų. Veislių įvairovė ir naujų infekcijų, sukeliančių infekcijas, atsiradimas, ypač Europos žemyne, nepadeda sukurti veiksmingų diagnostikos metodų.

Pastaruoju metu Europoje atsirado daugiau veislių, tokių kaip Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana ir Borrelia spielmanii. Be to, organizme borelijos spirochetos gali virsti cistomis arba likti kūno vietose, kurios nepasiekiamos imuninės sistemos ląstelėms.

Būdamas „nematomas“ imuninei sistemai. Be to, buvo įrodyta, kad audiniuose gali būti bakterijų fragmentų, kurie turi stipriai priešuždegiminių savybių. Manoma, kad jie yra atsakingi už lėtinius Laimo ligos simptomus, nepaisant neigiamų tyrimo rezultatųlaboratorija.

Nuorodos

1. Witecka-Knysz E. ir kt., Laimo liga: kodėl taip sunku diagnozuoti? Laboratorinė diagnostika 2007 balandis.2. Moore A. ir kt. Dabartinės gairės, bendri klinikiniai spąstai ir būsimos Laimo ligos laboratorinės diagnostikos kryptys, Jungtinės Valstijos. Emerg Infect Dis. 2016 liepos 22 (7) .3. Laboratorinė erkių platinamų ligų diagnostika.Darbo grupės rekomendacijos: Nacionaliniai laboratorijos diagnostikos rūmai, Nacionalinis visuomenės sveikatos institutas-Nacionalinis higienos institutas, Nacionalinis konsultantas infekcinių ligų srityje, Užkrečiamųjų ligų ir neuroinfekcijų skyrius, Medicinos universitetas Balstogė, Lenkijos virusologijos draugija, Varšuva, 2014 m. Hosseini S. i co: Enzyme-linked Imunosorbent Assay (ELISA) nuo A iki Z. Springer 2022.

Apie autoriųKarolina Karabin, medicinos mokslų daktarė, molekulinė biologė, laboratorijos diagnostė, Cambridge Diagnostics PolskaPagal profesiją biologas, specializuojasi mikrobiologijoje ir laboratorinis diagnostikas, turintis daugiau nei 10 metų laboratorinio darbo patirtį. Molekulinės medicinos koledžo absolventas ir Lenkijos žmogaus genetikos draugijos narys. Mokslinių tyrimų stipendijų vadovas Varšuvos medicinos universiteto Hematologijos, onkologijos ir vidaus ligų katedros Molekulinės diagnostikos laboratorijoje. Varšuvos medicinos universiteto 1-ajame medicinos fakultete apgynė medicinos biologijos krypties medicinos mokslų daktarės vardą. Daugelio mokslinių ir populiarių mokslo darbų laboratorinės diagnostikos, molekulinės biologijos ir mitybos srityse autorius. Kasdien, kaip laboratorinės diagnostikos srities specialistas, jis vadovauja Cambridge Diagnostics Polska turinio skyriui ir bendradarbiauja su CD Dietary Clinic dietologų komanda. Praktinėmis žiniomis apie ligų diagnostiką ir dietoterapiją jis dalijasi su specialistais konferencijose, mokymuose, žurnaluose ir interneto svetainėse. Ją ypač domina šiuolaikinio gyvenimo būdo įtaka molekuliniams procesams organizme.

Kategorija:

Tyrimai